INFORMAZIONI SU

Corso integrato di Biologia ed Embriologia. Biologia applicata (Modulo II)

Programma dell'insegnamento - Corso di laurea in Biotecnologie

CORSO DI STUDIO: BIOTECNOLOGIE                                                         a.a. 2015/2016

 

Denominazione insegnamento:  Corso integrato di di Biologia ed Embriologia. Biologia applicata (Modulo II)


Docente

prof. Roberta Benetti (roberta.benetti@uniud.it)

Crediti

5 CFU

Programma

  • Concetti fondamentali sul ciclo cellulare: le fasi, i checkpoints, l'arresto del ciclo, l'apoptosi. Metodi sperimentali per valutare arresto cellulare e apoptosi. Strumentazione da laboratorio per biologia cellulare (centrifughe, cappe, incubatori e microscopi).
  • La sicurezza nei laboratory: norme ed accorgimenti per muoversi con sicurezza nel laboratorio. I microrganismi inquinanti, prevenzione e cura degli inquinamenti.
  • Le tecniche delle colture cellulari in vitro; allestimento di una coltura cellulare; terreni di coltura, loro caratteristiche e proprietà. L'emocitometro, il suo funzionamento e le diluizioni cellulari.
  • Osservazione delle cellule al microscopio e conclusioni circa concentrazione e fattori indispensabili alla crescita di linee cellulari (spazio, nutrienti e ancoraggio). Conta delle cellule con emocitometro. Curve di crescita e loro rappresentazioni. Danni alle cellule: diversi tipi di danno (DNA, citoscheletro...). Effetti del danno. Utilizzo di droghe per danno al dna e danno ai microtubuli
  • L'inattivazione del cromosoma X e le diverse tappe nel suo processo. XiST e TSIX.
  • Gli RNA non codificanti, la loro nuova scoperta e la lora importanza nella biologia. Visualizzazione nel laboratorio dei corpi di Barr. Determinazione dell'origine femminile o maschile, diploide o poliploide delle cellule in coltura; e definizione del grado di poliploidia attraverso il riconoscimento dell'inattivazione del cromosoma X e visualizzazione dei corpi di Barr.
  • La tecnica dell'immunofluorescenza; metodo diretto e indiretto; antigeni-anticorpo. Vantaggi e svantaggi rispetto altre tecniche qualitative e quantitative
  • I microtubuli e la loro importanza nel ciclo cellulare; droghe contro la loro funzionalità. Concetto generale sulla funzionalità e riorganizzazione dei microtubuli durante il ciclo cellulare. La sensibilità dei microtubuli a sostanze anti-mitotiche. L'arresto della cellula in mitosi attraverso l'utilizzo del taxolo; modalità di azione del taxolo.
  • L'apoptosi e le tecniche di laboratorio qualitative o quantitative per analizzarla. Principi ed utilizzo della tecnica del tripan blue.
  • Principi dell'oncogenesi come alterazione del normale ciclo di proliferazione cellulare. Alterazione della proliferazione e del ciclo cellulare di una cellula. I tumori: definizione, eziologia e patogenesi. La diagnosi precoce (metodi di diagnosi). Le tappe evolutive di un tumore (iniziazione, promozione e progressione). Tumori benigni e tumori maligni. Oncogeni e oncosoppressori. L'angiogenesi tumorale e la metastatizzazione. Il sistema immunitario e i tumori (antigeni tumorali riconosciuti dalle cellule TCD8 e meccanismi con i quali il tumore evade il sistema immunitario). Ereditarietà e tumori
  • Subfrazionamento cellulare: Estrazione della componente proteica totale, citoplasmatica e nucleare da cellule in coltura.
  • Estrazione e corsa elettroforetica di DNA genomico da normale cellula ciclante o da coltura che ha innescato apoptosi. Confronti.
  • I principi dell'elettroforesi di proteine, i buffers di caricamento e di corsa (principi), visualizzazione delle proteine su gel (comassie brilliant e silver staining), la stima dei pesi molecolari. Le fasi di un western blot: elettroforesi su gel, trasferimento su membrana, saturazione o blocking, legame dell'anticorpo primario e secondario, rivelazione o detection. Quantificazione in bradford dei lisati proteici (componente citoplasmatica, nucleare e totale). Caricamento di un gel di poliacrillammide.
  • Come presentare scientificamente i risultati degli esperimenti.
  • Concetti di bioinformatica per la biologia cellulare e l’analisi dei geni: Utilizzo di tool bioinformatici per analisi single gene e multi gene. Data mining con approccio single gene (Genecards, Pubmed), uso di genome browser (Ensembl, UCSC), interrogazione di database di espressione (GEO) e di interazioni proteiche (iRefWeb). Analisi funzionale di liste di geni (David/EASE, GSEA, IPA).

 

Ulteriori attività di didattica assistita

Laboratorio Manipolazione e contenimento di topi, ratti e conigli. Prelievi di: fluidi, tessuti, gameti ed embrioni. Tecniche di preparazione, valutazione e conservazione di: fluidi, tessuti, gameti ed embrioni.

Testi consigliati

Eila Kaliste The Welfare of Laboratory Animals. Springer, ISBN 978-1-4020-2271-5 (e-book), 2007;

Patrick E. Sharp, Marie C. La Regina. The Laboratory Rat. ISBN 0-8493-2565-1, CRC Press LLC, 1998;

Mark A. Suckow, Peggy Danneman, Cory Brayton. The Laboratory Mouse. ISBN 0-8493-0322-2, CRC Press, 2001.

Ulteriore materiale didattico o informazioni reperibili: https://materialedidattico.uniud.it/http://www.animalresearch.info/;http://www.aisal.org/http://www.felasa.eu/http://iclas.org/http://www.aalas.org/

Modalità d'esame

Test di accertamento durante il corso e colloquio finale